学会・論文発表一覧

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    2016年

  • NGSを用いた染色体解析における多核胚の評価 (第61回 日本生殖医学会)

    〇吉貝香里1、松田有希野1、加藤武馬2、加藤麻希2、新井千登勢1、浅井菜緒美1、中野英子1、倉橋浩樹2、澤田富夫1

    1さわだウィメンズクリニック、2藤田保健衛生大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

    目的

    Time-lapse cinematographyの導入により、胚発生過程の連続撮影が可能となり、それに伴い多核胚が頻繁に観察されるようになった。多核胚は、その発生速度が遅いことや、高確率で染色体異常が認められるとの報告がある。そこで我々は、Embryo ScopeTM  ( ES ) で形態観察し、その後廃棄となった多核胚のNext Generation Sequence ( NGS ) 解析を行ったのでその結果を報告する。

     

    対象・方法

    2013年1月~2015年1月に採卵し、ESで形態観察した8症例のうち2細胞期~8細胞期において多核を有する胚で、妊娠成立後に廃棄となった胚盤胞12個を患者の同意を得てNGSを用いて染色体解析を行った。患者の平均年齢は33.9±4.0歳であった。

     

    結果

    12個の胚盤胞のうち、正倍数の核型を持つと考えられる胚は5個(41.7%)であった。その他の胚は、16番染色体の異常が4個と最も多く(57.1%)、また複数の染色体異常が認められる胚も4個(57.1%)であった。患者年齢の比較では正倍数胚と染色体異常胚の間で有意差はないものの、染色体異常胚の患者年齢が高い傾向にあった。

     

    結論

    今回の多核胚のNGS解析において、染色体異常を有する胚もあれば、40%程度であったが正倍数を持つと考えられる胚もあることから、多核の原因が必ずしも染色体異常にあるとは言えないと考えられる。16番染色体異常は、流産胎児染色体検査で高頻度に検出されるものである。今回の胚盤胞NGS解析段階でもこの染色体異常が散見された。その他の染色体異常を有する可能性があるが、それらの胚は胚盤胞まで到達せずに、発生停止胚となっているとも考えられる。以上より、多核胚は必ずしも移植から除外する必要性はないが、妊娠しても流産する可能性が含まれていることに留意する必要性があると考えられ、将来のPGSの重要性が指摘される。

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  • HRT周期での凍結融解胚移植における黄体ホルモン投与開始日の投与方法の違いが胚移植日のE2およびP4に与える影響 (第61回 日本生殖医学会)

    新井 千登勢、吉貝 香里、松田 有希野、浅井 菜緒美、中野 英子、澤田 富夫

    目的

    HRT周期下での凍結融解胚移植における黄体ホルモン補充は、胚の着床および妊娠維持に必須である。当院ではHRT周期での凍結融解胚移植において、卵胞ホルモン投与後十分な子宮内膜厚が確認できれば、黄体ホルモン補充を注射あるいは膣坐薬によって開始し、その後移植日までは膣坐薬により黄体ホルモンを補充する。そこで今回は黄体ホルモン投与開始日(D0)の投与方法の違いが胚移植日のE2濃度およびP4濃度に影響を与えるかを検討した。

    方法

    2015年1月~2016年5月にHRT周期下で凍結融解胚移植を行った528周期、356症例(平均年齢36.4±4.3歳)を対象とした。D0にプロゲホルモン25mg®を使用した注射投与群(I群)と自家製P坐薬300mg又はルティナス®膣錠100mg又はルテウム®膣用坐薬400mgを使用した膣坐薬投与群(S群)の2群間で、胚移植日の血中E2濃度(ng/ml)および血中P4濃度(ng/ml)を比較した。また、妊娠成立群と妊娠不成立群において、2群間で胚移植日の血中E2濃度(ng/ml)および血中P4濃度(ng/ml)に差があるかを検討した。

    結果

    胚移植日の平均血中E2濃度はI群で289.5±212.7、S群で280.1±138.6であった。さらに、平均血中P4濃度はI群で12.6±5.5、S群で12.6±6.1であり、血中E2濃度および血中P4濃度ともに両群で有意差を認めなかった。また、妊娠成立群の平均血中E2濃度はI群で313.6±247.8、S群で265.8±147.8、平均血中P4濃度はI群で12.7±5.2、S群で11.7±4.7であった。妊娠不成立群の平均血中E2濃度はI群で282.9±201.3、S群で284.1±136.6、平均血中P4濃度はI群で12.6±5.6、S群で12.9±6.4であり、妊娠成立群および妊娠不成立群でI群、S群ともに有意差を認めなかった。

    考察

    HRT周期下での凍結融解胚移植において、D0での黄体ホルモン補充方法の違いが胚移植日のE2濃度およびP4濃度に影響を与えないことが示された。さらに補充方法の違いは妊娠成立にも関係しないことが示唆された。 閉じる

  • 2015年

  • Embryo ScopeTMを用いて胚の性選別ができるか (第33回 日本受精着床学会)

    新井 千登勢、吉貝 香里、松田 有希野、中野 英子、澤田 富夫

    目的

    最近、タイムラプスインキュベーターを用いて、胚発生速度から胚の性別が選別できるのではないかとの報告(Bronet et al.,2015.)があった。そこで、今回当院ではEmbryo ScopeTM(ES)を用いて、胚発生速度と出生児の性別を後方視的に検討した。

    対象と方法

    ESにて培養・凍結後2013年4月~2014年9月に初期胚及び胚盤胞移植を施行し、生児を得た43症例を対象とした。PN出現時間(PNA)、PN消失時間(PNF)、3-4細胞時間(s2)、桑実胚到達時間(tM)、胚盤胞到達時間(tB)を算出し、各々の平均値を出生児の性別ごとに比較した。また、ESによる凍結胚の選別が性別に何らかの影響を与えている可能性を考え、ES導入前後過去5年間の男女数の推移を比較した。

    結果

    男児:女児はPNAで6.3:7.2であり、男女間で有意差が認められた(p<0.05)。またPNFは男児:女児で22.3:22.3、s2は男児:女児で3.3:3.4、tMは83.7:84.6であり、いずれも男女間で有意差は認められなかった。さらにtBは男児:女児で107.8:109.9であり、男女間で有意差が認められた(p<0.05)。一方で、年度別の男女数はES導入後の2013年以降女児の出生数が増加傾向にあったが、導入前後で有意差は認められなかった。当院の男女比(2013年)は男児45.2%、女児54.8%であり、2013年度の統計局の全国出生比率(男児48.6%、女児51.3%)と比較しても女児の出生率が高い結果となった。

    結論

    PNA及びtBが胚の性別を選別する指標となりうる可能性が示唆された。また、男女間で有意差は認められなかったが、男児となる胚は女児となる胚と比べ、胚発生速度が速い傾向にあった。また、ES導入後女児の出生数が増加傾向にあることが認められた。今後症例数を重ね、これらの傾向について更に検討していく必要があると考えられる。 閉じる

  • 2013年

  • Embryo Scopeを良好胚選別に有効的に利用するには (第58回 日本生殖医学会)

    〇吉貝 香里、堀 紗耶未、中野 英子、澤田 富夫

    目的
    EmbryoScopeTMは培養システム外に胚を取り出すことなく形態観察できるので、胚に対するストレスを軽減できるメリットがある。また観察ポイントを細かく設定することで、個々の胚の発育スピードだけでなく複数胚を同時に確認できるので良好胚を選別しやすくなることが期待される。今回本システムを用いることにより従来までの良好胚選別法との比較を行った。

    対象および方法
    ICSI施行後の胚を速やかに本システム内に静置し培養を継続した。培養条件はsingle step mediumを用い5%O2-5%CO2-90%N2下に培地交換せず5-6日間培養を行った。ICSI後のPN出現時間、PN消失時間、第1分割時間、第2分割時間、compactionの開始時間、morula~blastocyst発生時間を記録モニターより確認し、その推移と従来の形態学的評価(Veek分類・Gardner分類)との関係を比較検討した。

    成績
    ①受精胚のうちD2で選別Freezeもしくは新鮮胚移植を行った従来基準での最良好胚と、それ以外の継続培養を行った胚との間にはPN消失時間、第1分割時間に有意差があった。②継続培養を行った胚のうちblastocystまで発育し凍結保存ができた胚と凍結保存に適さないと評価した胚との間にはPN消失時間、第1分割時間、compaction開始時間に有意差がみられた。③PN出現時間、PN消失時間が平均より短い(発育の速い)胚は胚盤胞での形態評価で良好胚になる確率が高かった。④morula~blastocystへの発育速度が速い胚は形態学的に良好胚になる確率が高かった。

    考察
    EmbryoScopeTMによる発育スピードのtime-lapse観察は良好胚を選別する方法として有用な手段として利用できる可能性がある。従来の選別基準と比較して一層有効かはさらに症例を重ね検討する必要がある。 閉じる

  • 2012年

  • Single mediumはSequential mediumに比べ有用か (第57回 日本生殖医学会)

    吉貝香里 堀紗耶未 澤田富夫

    妊娠成績向上のための培養環境のQuality controlは極めて重要である。今回我々は、異なるタイプの培養液2種類Sequential Medium(Sq.M.群)Single Medium(S.M.群)を用い、その妊娠成績を比較検討した。
    2010年1月~2010年3月までのSq.M.群218周期(36.04.2歳)S.M.群266周期(36.54.0歳)計484周期を対象とした。
    Sq.M.群、S.M.群ともに、採卵後c-IVF/ICSIにて受精させ、Fertilization medium にて培養、その後Sq.M.群をday1で受精確認後Cleavage mediumに、day3にて≧8cellの胚をBlastocyst mediumに移し3段階の培地交換を行った。S.M.群は、day1で受精確認後、Single mediumに移し、同一mediumでday5-6まで継続培養を行った。卵・胚の培養は0.5ml volume/well、37℃ 5%CO2、5%O2、90%N2ドライインキュベーター環境下で行った。両群間における受精率、胚盤胞発生率、移植あたりの妊娠率、胚のGrade別の着床率を比較検討した。Grade評価には、初期胚はVeeck分類、胚盤胞はGardner分類を用いた。統計処理はχ2検定またはFisher’s exact probabilityを用いた。
    【結果】受精率はSq.M.群、S.M.群それぞれ81.6%、82.6%、また胚盤胞発生率はSq.M.群58.4%、S.M.群で61.1%であり、S.M.群でやや高い傾向を示した。さらに移植あたりの妊娠率はSq.M.群、S.M.群それぞれ年齢別(①~30歳、②~35歳未満、③~40歳未満、④40歳以上)で比較すると、S.M.群で①40.9%②40.0%③27.83%④13.79%、S.M.群では①40.0%②42.7%③31.3%④15.3%であり、これもS.M.群でやや高い傾向であった。胚のGrade別の着床率は、初期胚でSq.M.群、S.M.群それぞれG1 35.7% vs29.6%、G2 33.3% vs32.4%、G3 17.2% vs19.7%であった。また胚盤胞では3BB以上の良好胚を比較し、Sq.M.群、S.M.群それぞれscore AA 32.8%vs56.0%(p<0.05)、 AB 25.9%vs42.9%、 BA 37.5%vs100%、 BB 34.5%vs31.6%であった。着床率は初期胚ではSq.M.群で高値を示したが、胚盤胞ではS.M.群で全体的に高い傾向となった。S.M.群のscore CCでは妊娠例がなかった。
    【考察】Single mediumはSequential mediumに比較し受精・着床率に良好な成績を示し、特に胚盤胞移植で良好な結果を得た。培養手技の簡素化、また単一胚移植の面からも有用な培養環境を作ることができる。胚盤胞凍結においてはBB以上の胚のみ保存するのが有効と考えられた。 閉じる

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