渡辺 真一¹　吉貝 香里¹　冨田 麻莉¹　鈴木 篤智¹　野呂 麻理子¹　松田 有希野¹

宮井 俊輔²　加藤 武馬²　中野 英子¹　倉橋 浩樹²　澤田 富夫¹

1 さわだウィメンズクリニック

2 藤田医科大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

【目的】

胚発生において初期分割は重要な動態であり、タイムラプスモニタリングにより初期分割不良が観察された胚は胚盤胞発生率が低下するとの報告は多い。しかし初期分割不良を呈した胚でも胚盤胞に到達し、その移植による妊娠・出産例も我々はしばしば経験している。今回、初期分割不良でありながら胚盤胞に到達した胚の染色体解析を行い、初期分割良好であった胚盤胞と正倍数率を比較した。

【対象と方法】

2013～2018年に採卵・培養され、患者同意の得られた廃棄胚盤胞96個を対象としてNGS染色体解析を行った。これらの初期分割動態をEmbryoScope（Vitrolife）によるタイムラプス撮影画像を用いて観察し、第一分割で2細胞、第二分割で4細胞となった胚を良好分割群に、第一分割で3細胞以上、または第二分割で5細胞以上となった胚を不良分割群に分類した。

【結果】

良好分割群は53個、不良分割群は43個であった。正倍数胚、構成型異数胚、モザイク胚の割合は良好分割群で43.4%(23), 45.3%(24), 11.3%(6), 不良分割群で41.9%(18), 46.5%(20), 11.6%(5)であり、両群の正倍数率に有意差を認めなかった（良好分割群に対する不良分割群の正倍数率のオッズ比0.94）。

【結論】

初期分割不良は胚盤胞到達後の正倍数率を低下させないことが示された。初期分割不良胚であっても胚盤胞に到達した胚は初期分割正常胚と同様に移植に用いることが可能である。

冨田　麻莉 , 渡辺　真一 , 鈴木　篤智 , 松田　有希野 , 吉貝　香里 , 中野　英子 ,

澤田　富夫

【目的】

タイムラプスモニタリングによる胚の形動態学的評価は重要である。

特に初期分割では、1個の細胞が３個以上に分割するダイレクト分割、一旦分割した細胞が融合するリバース分割と呼ばれる分割を呈することがある。

今回、初期胚又は胚盤胞移植を行った胚の初期分割動態を分析し、妊娠率と流産率について比較検討を行った。

【対象と方法】

2013-2019年に採卵を行い、EmbryoScope(Vitrolife)で培養を行った胚のうち、初期胚移植(1050個)と胚盤胞移植(531個)を行った胚を対象として、初期分割動態の観察を行った。

第一分割で2細胞、第二分割で4細胞となった胚をA群、第一分割で３細胞以上になった胚をB群、第一分割で2細胞、第二分割で５細胞以上になった胚をC群、第一分割で3細胞以上となった後割球の融合が見られた胚をD群、第一分割で2細胞、第二分割で5細胞以上となった後割球の融合が見られた胚をE群に分類し、胚移植後の妊娠成績を比較した。移植は全て単一胚移植とした。

【結果】

初期胚移植の妊娠率及び流産率はA群22.4%(134/599), 27.6%(37/134)、B群5.9%(8/135),  25.0%(2/8)、C群12.7%(8/63), 50.0%(4/8)、D群19.0%(42/221), 33.3%(14/42)、E群21.9%(7/32), 71.4%(5/7)であり、A群はB群より妊娠率が有意に高かった(P<0.05)が流産率に有意差は認められなかった。

胚盤胞移植の妊娠率及び流産率はA群32.8%(94/287), 27.7%(26/94)、B群35.8%(34/95), 26.5%(9/34)、C群38.5%(15/39), 13.3%(2/15)、D群25.0%(25/100), 24.0%(6/25)、E群30.0%(3/10), 33.3%(1/3)であり各群間に妊娠率、流産率共に有意差は認められなかった。

【結論】

初期胚移植では第一分割でダイレクト分割が見られた胚の妊娠率は低いため、初期胚移植の際優先順位を下げることが望ましい。

胚盤胞移植では初期分割様式による移植成績の差は見られず、いずれの分割様式であっても胚盤胞に発育した胚は移植に用いることに問題はないことが示された。

渡辺 真一¹　吉貝 香里¹　冨田 麻莉¹　鈴木 篤智¹　松田 有希野¹

宮井 俊輔²　加藤 武馬²　中野 英子¹　倉橋 浩樹²　澤田 富夫¹

1 さわだウィメンズクリニック

2 藤田医科大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

近年のタイムラプスモニタリングインキュベータの普及に伴い、胚の連続的観察により胚発生能および正倍数性を推測する試みが数多く行われている。第一分割時間、コンパクション時間、胚盤胞到達時間といった事象の発生時間による評価、また初期分割動態、コンパクション時細胞数、胚盤胞の収縮といった形動態学的評価が報告されており、それらによる妊孕性の評価については多くのエビデンスが得られているが、正倍数性の評価が可能かどうかはいまだ議論が続いている。

その中で我々は初期分割動態に着目した。初期分割で1細胞が3細胞以上に分割する、いわゆる”direct cleavage”、一旦分割した細胞が融合する”reverse cleavage”といった不規則な分割を呈した胚は胚盤胞到達率が低いことが報告されているが、そうした胚が胚盤胞に到達した場合の移植妊娠率は正常な初期分割であった胚盤胞の妊娠率と同等であるとの報告も見られる。

我々の検討では、第一あるいは第二分割で不規則な分割を呈した胚は正常初期分割胚と比較して初期胚移植妊娠率が有意に低率であった（14.4% vs 22.4%）が、そうした胚が胚盤胞に到達した場合の妊娠率は同等であり（31.5% vs 32.8%）、さらに患者同意を得た廃棄胚盤胞のNGS解析を行ったところ初期不規則分割胚の正倍数率は初期正常分割胚と比較して有意に高率となった（54.3% vs 32.1%）。すなわち、初期分割動態は初期胚移植の胚選択には有用だが、胚盤胞到達後の妊孕性・正倍数性は評価できなかった。言い換えれば、初期分割が不規則であった胚盤胞も初期分割正常胚盤胞と同様に移植に用いることが可能であると示された。

不規則な初期分割は染色体分配異常を起こすと考えられているが、そのような胚が胚盤胞に到達する過程で異数性細胞の除外など修正機能が働いていることを示唆する報告も最近ではなされている。今回、上記のような初期分割動態による胚の評価の詳細をお伝えしたい。

Shinichi Watanabe1, Kaori Yoshikai1, Mari Tomida1, Shigenori Suzuki1,
Yukino Matsuda1, Shunsuke Miyai2, Takema Kato2, Hiroki Kurahashi2,
Eiko Nakano1, Tomio Sawada1

1 Sawada Women’s Clinic, Nagoya, Japan
2 Institute for Comprehensive Medical Science, Fujita Health University, Toyoake, Japan

Study question:
Does euploid rate decrease when the irregular first or second cleavage embryos reach the blastocyst?

Summary answer:
The euploidy of the irregular first or second cleavage blastocysts was equivalent to the normal cleavage blastocysts.

What is known already:
There are some reports that aneuploidy is high when the irregular cleavage embryos develop into blastocysts but there are reports that the rate of transfer pregnancy and miscarriage of irregular cleavage blastocysts is equivalent to that of the normal cleavage blastocysts.

Study design, size, duration:
Retrospective analysis was conducted on 96 discarded blastocysts with consent from patients out of embryos collected and cultured in our clinic from 2013 to 2018. All of these embryos were time-lapse monitored by EmbryoScope (Vitrolife).

Participants/materials, setting, methods:
The subject embryos were biopsied with TE and NGS chromosome analysis was performed. These embryos were classified by time-lapse videos, those with 2 cells in the first cleavage and 4 cells in the second cleavage are the good cleavage groups, those with 3 or more cells in the first cleavage, or those with 5 cells or more in the second cleavage are the irregular cleavage groups.

Main results and the role of chance:
As a result of image analysis by time-lapse monitoring, there were 53 good cleavage groups and 43 irregular cleavage groups. The proportions of euploid embryos, aneuploid embryos and mosaic embryos were 43.4% (23), 45.3% (24) and 11.3% (6) in the good cleavage group, 41.9% (18), 46.5% (20), and 11.6% (5) in the irregular cleavage group, there was no significant difference in euploid rate between the two groups (The odds ratio of the euploid rate of the irregular cleavage group to the good cleavage group was 0.94).

Limitations, reasons for caution:
Because PGT-A is not approved in Japan, this study was conducted using only discarded embryos that were not used for transfer with the consent of the patient.

Wider implications of the findings:
This study showed that Irregular cleavage in early embryogenesis did not reduce the euploid rate after reaching the blastocyst. Irregular cleavage embryos that have reached the blastocyst need not be excluded from transfer.

2020eshreEposter

吉貝香里1　松田有希野1加藤武馬2　宮井俊輔2　新井千登勢1　鈴木篤智1　冨田麻莉1中野英子1　倉橋浩樹2澤田富夫1
1さわだウィメンズクリニック
2藤田医科大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

目的
移植に供する胚の選別方法は、Veek分類やガードナー分類を基に、各施設でそれぞれ独自に基準を設けていることが多いと思われる。正倍数胚を移植すると70％程度の高い妊娠率が得られるが、形態学的評価のみでは胚の倍数性までは判定できない。
そこで、NGS染色体解析結果より、倍数性と当院における凍結胚の移植順位の決定付けがどの程度一致しているか後方視的に検討した。

方法
当院にて凍結保存後に廃棄した研究同意胚盤胞114個を用い、NGS染色体解析を行った。
廃棄胚盤胞は、Embryo Scopeで培養した際の画像を後方視的に胚の分割形態や、分割時間、ガードナー分類、胚盤胞径など再検討し、移植優先順位が倍数性と一致しているか比較した。なお当院ではDay2分割期胚凍結を1ないし2個凍結しており、第一分割の時間と分割時の細胞形態を考慮して選別する。廃棄胚盤胞のデータには分割期胚を融解後胚盤胞に至った胚(14個)も含まれる。

結果
正倍数胚、異数胚、モザイク胚はそれぞれ 44.7%(51/114), 44.7%(51/114), 10.5%(12/114)であった。また、分割期胚で融解後胚盤胞に至った胚はそれぞれ64.3%(9/14),21.4%(3/14),14.3%(2/14)であった。ガードナー分類3BB以上の胚76個では正倍数胚、異数胚、モザイク胚は52.6%(40/76),38.2%(29/76),9.2%(5/76)であった。胚盤胞径では、160μm以上の胚70個でそれぞれ52.9%(37/70),34.3 %(24/70),12.9%(9/70)であった。移植順位が2位までになっていた胚61個のうち正倍数胚、異数胚、モザイク胚それぞれ55.7%(34/61),36.1%(22/61),8.2%(5/61)であった。正倍数胚でありながら順位が下位になった胚は第二分割期より遅延しているものが多かった。異数胚で順位が上位であった胚も同様に第一第二分割遅延が認められた。

結論
当院ではDay2胚を凍結する際の選別基準は正倍数胚率が高いことより、現在の基準で選別できていると考えられる。胚盤胞については、ガードナー分類のみでは正倍数率は約1/2であり、その他に胚盤胞径を考慮して順位の決定付けをするのが望ましいと考えられた。