学会・論文発表一覧

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    2018年

  • 胚盤胞の外側または胚盤胞腔内に存在する割球のNGSによる解析 (第36回 日本受精着床学会)

    新井 千登勢1)、吉貝 香里1)、加藤 武馬2)、加藤 麻希2)、宮井 俊輔2)、松田 有希野1)、鈴木 篤智1)、花井 里沙1)、中野 英子1)、倉橋 浩樹2) 、澤田 富夫1)、
    1)さわだウィメンズクリニック, 2)藤田保健衛生大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

    【目的】
    胚盤胞の外側に割球(外割球)あるいは胚盤胞腔内に割球(内割球)が残存するものがしばしば観察される。これらの割球の発生原因は明らかになっていないが、多核細胞や一度分割した後に再融合を生じた細胞がcompactionの際に排除されて残存している場合が多い。今回我々は両割球がどのようなものであるかを探るため、外割球または内割球の細胞生検を行い、染色体解析を試みた。さらに、それらの割球を含む同一胚盤胞のICMやTEと染色体比較解析を行った。

    【対象と方法】
    当院で採卵・凍結後、廃棄となった胚盤胞のうち、外割球を有する20個と内割球を有する3個の計23個を用いた。対象胚は患者の同意を得て研究を行った。外割球採取の患者の採卵時の平均年齢は35.0±3.7歳、内割球は37.3±1.7歳であった。各胚盤胞から外割球または内割球とICM,TEをそれぞれ採取し、全ゲノム増幅後、次世代シークエンサーで染色体比較解析を行った。

    【結果】
    染色体解析の結果、外割球は正倍数性2個、異数性4個、モザイク型の異常2個、判定不能12個であった。内割球は異数性1個、判定不能2個であった。さらに、ICMやTEとの染色体比較解析の結果、外割球は5/20個が、内割球は1/3個が一致した。

    【考察】
    今回の解析で外割球と内割球は正倍数性のものは僅かであり、内・外割球に含まれるDNA量が少ない為、判定不能となるケースが多かった。それらは染色体が断片化されるアポトーシスの過程にあると考えられる。すなわち、外割球と内割球は染色体異常などの異常細胞を排除することにより、胚として自己修復を図っている過程を反映している可能性が示唆された。また、ICMやTEとの一致率が低く、胚の核型を反映しているとは言い難く、これらの割球をPGSやPGDの材料として用いることは出来ないが、胚の染色体異常の程度を測る指標の一つとして見なすことができるのではないかと考える。 閉じる

  • NGSによる染色体解析からみた良好胚盤胞の選択基準 (第36回 日本受精着床学会)

    ○松田 有希野1)、吉貝 香里1)、加藤 武馬2)、宮井 俊輔2)、加藤 麻希2)、新井 千登勢1)、鈴木 篤智1)、花井 里沙1)、中野 英子1)、倉橋 浩樹2)、澤田 富夫1)
    1)さわだウィメンズクリニック、2)藤田保健衛生大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

    目的
    我々は、染色体正倍数の胚は、異数性胚に比べ、拡張胚盤胞の直径が大きいこと、Compactionに関与する細胞数が多いことを報告した。この際、配偶子形成過程で発生する構成型異常胚と受精後の初期胚で発生するモザイク型異常胚の2つをまとめて異数性として検討したが、今回、異数性を構成型とモザイク型の2つに分類し、再検討した。

    方法
    患者の同意を得られた廃棄胚盤胞(46個、患者平均年齢33.6±4.1歳)をNGSにより染色体解析を行った。胚盤胞は、正倍数群(N群14個)、構成型異数性群(C群12個)、モザイク群(M群11個)、構成型異数性とモザイクの両方を持つ混合群(CCA群9個)に分類した。検討項目は、Compaction完了時間、Compaction時細胞数、Compaction に関与した細胞数、胚盤胞到達時間、培養115時間時の胚盤胞の直径サイズとした。

    結果
    平均年齢はN群32.6±2.9歳、C群36.2±4.4歳、M群32.7±3.8歳、CCA群37.3±3.2歳であり、N群、M群に対してC群とCCA群は有意に年齢が高かった。Compaction完了時間とCompaction時細胞数については4群間に有意差がなかった。しかし、Compactionに関与した細胞数は、N群(9.5±1.9個)と比較してC群(7.7±2.4個)、M群(7.8±2.0個)で有意に少なかった。また、胚盤胞到達時間はN群(96.9±4.1時間)と比較して他の3群が有意に遅かった。(C群105.3±7.5時間、M群102.6±8.7時間、CCA群101.3±7.0時間)さらに、培養115時間時の胚盤胞サイズは、N群(168.6±24.9μm)と比較し、M群(150.3±22.7μm)とCCA群(154.4±15.5μm)において有意差はないものの、C群(141.6±26.1μm)は有意に小径であった。

    考察
    今回の結果より、培養115時間時、小径胚盤胞は構成型異常をもつ胚である可能性が示唆された。また、Compactionに関与した細胞数が少ない胚や、胚盤胞到達時間が、100時間を超えてくる胚についても、染色体異数性を持つ胚である可能性が示唆された。以上の結果より、凍結や移植を行う胚の優先順位付けの際にこの条件に従い、妊娠率や流産率への影響を検討していきたい。 閉じる

  • 同一患者間におけるCaイオノフォアによる卵子活性化の効果の検討 (第58回 日本卵子学会)

    〇新井 千登勢、吉貝 香里、松田有希野、中野 英子、澤田 富夫

    目的
    Caイオノフォア(以下Ca)は精巣精子や不動精子使用時に、卵子活性化が起こらず不受精となるのを回避する目的で使用されてきた。また、胚発育遅延、胚盤胞到達率が低い症例にも有効であるとの報告もある。当院で採卵を行い、低受精率や分割不良、精子運動性不良が見られた同一患者間において、Ca施行前後の成績を後方視的に検討した。

    対象
    2013年1月~2017年12月に採卵し、ICSI後Caを施行した患者10名、平均年齢36.5±3.5歳を対象とした。同一患者間で、Ca非施行周期とCa施行周期において、受精率、分割率、着床率、臨床妊娠率、出産率を比較した。また、2016年1月~12月に採卵・ICSI後Ca非施行患者の中から無作為抽出したノーマル群とCa施行群で受精率、分割率を比較した。

    結果
    同一患者間でのCa非施行周期とCa施行周期の受精率は47.8% vs. 87.4%で有意な差があった。分割率は100% vs.100%、着床率は6.3% vs. 37.0%、臨床妊娠率は6.3% vs. 29.6%、出産率は6.3% vs. 11.1% であり、分割率と臨床妊娠率、出産率に有意な差はなかったが、着床率に有意な差があった。さらに、この5項目をICSIの際に使用した精子別(新鮮精子・凍結精子・TESE精子・MESA精子)に分け、Ca非施行周期・施行周期を比較した結果、新鮮精子と凍結精子を用いたCa施行周期において受精率に有意な差があった。また、ノーマル群とCa施行群の受精率、分割率は80.5% vs.87.4%、98.1% vs. 100%であり、有意な差はなかった。

    考察
    Ca処理の必要な患者において、受精率と着床率が飛躍的に向上した。過去に受精障害や胚発生不良があった場合の改善策として、また不良な新鮮精子や凍結精子を使用する場合も、Caを施行することが有用であると考える。今後症例数を増やし更なる検討を行うとともに、1回のICSIでCa施行群と非施行群に分けた比較検討も必要である。 閉じる

  • 2017年

  • 5日目、6日目の胚盤胞凍結時の細胞のサイズと染色体解析 (第58回 日本卵子学会)学術奨励賞口演部門受賞

    〇松田 有希野1)、加藤 武馬2)、吉貝 香里1)、新井 千登勢1)、中野 英子1)、澤田 富夫1)、倉橋 浩樹2)

    1)さわだウィメンズクリニック、2)藤田保健衛生大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

    目的

    我々は、以前に胚盤胞の形態学的評価と染色体の正倍数性は一致しないという報告をした。しかし、本邦では着床前スクリーニングは認められていないため、移植に用いる胚は形態評価に頼らざるを得ない。よって今回、胚盤胞の大きさと染色体異常との関連をEmbryo ScopeTM(ES)とNGSを用いて調べた。

    方法

    正常受精した胚を5日目(D5)または6日目(D6)で胚盤胞凍結した。後に、廃棄となり患者の同意を得られた胚盤胞(D5胚盤胞22個、D6胚盤胞8個)をNGSにより染色体解析を行った。胚盤胞の大きさは、ESを用いて、凍結直前の最終拡張時胚盤胞の画像から直径2箇所の平均長を求めた。患者平均年齢は35.2±4.2歳であった。

    結果

    D5での染色体正常胚は8個(36.4%)、染色体異常胚は14個(63.6%)であった。平均年齢は染色体正倍数胚で34.1±2.7歳、染色体異数胚で35.9±4.0歳であり有意差はなかった。しかし、胚盤胞の大きさで、染色体正倍数胚で175.9±10.1㎛、染色体異数胚で143.1±30.5㎛となり染色体正倍数胚が染色体異数胚より有意に大きかった。D6での染色体正倍数胚は2個(25.0%)、染色体異数胚は6個(75.0%)であった。平均年齢は染色体正倍数胚で33.5±7.5歳、染色体異数胚で35.3±3.9歳であり有意差はなかった。胚盤胞の大きさは、染色体正倍数胚で202.5±10.0㎛、染色体異数胚で158.1±30.7㎛であり、有意差はないものの染色体正倍数胚のほうが染色体異数胚より大きいことがわかった。

    考察

    今回の検討では、染色体正倍数胚と異数胚の間に年齢による差がないことから、どの年代であってもD5凍結時170㎛、D6凍結時200㎛まで胚盤胞が大きくなっていることを確認してから凍結することにより正倍数胚を移植できる確率が高くなると期待される。

     

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  • NGSを用いたTE・ICM間における核型一致率の比較 (第58回 日本卵子学会)学術奨励賞口演部門受賞

    吉貝香里1,2 加藤武馬2 松田有希野1,2 新井千登勢1 浅井菜緒美1 中野英子1

    澤田富夫1 倉橋浩樹2

    1さわだウィメンズクリニック、2藤田保健衛生大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

     

    目的

    近年、PGSやPGDの生検に胚盤胞期における栄養外胚葉(TE)が用いられることが多い。割球生検と比較してTE生検が胚の着床に影響しないことが報告されているが、TEで観察された染色体核型が内細胞塊(ICM)を反映していないという報告もある。(これまでFISHやアレイCGHを用いて、ICM/TEの染色体核型の比較解析が行われてきたが、報告毎に結果が異なり、統一した見解は得られていない。)そこで我々は、モザイク型染色体異常や微細な構造異常の検出が可能なNGSを用いて、同胞TEとICMを比較し、TE生検が胚盤胞期におけるICMの核型を反映しているか解析を行った。

    対象・方法

    2010年~2015年までに採卵後凍結し、廃棄となった18症例24個の胚盤胞を用い、患者同意を得て研究を行った。患者年齢は34.5±3.6歳であった。TEを3時の位置で1か所採取(TE1)、6時または12時の位置で採取(TE2)、さらにICMをそれぞれ採取し、核型の比較検討を行った。

    結果

    ICMとTEの核型一致率は52.9%であった。そのうち、ICM/TEともに正倍数を示す胚は12個 (35.3%) であった。核型が不一致となり、どちらかに染色体異常を有した胚はモザイク異常であり、TEで検出された異常がICMで検出されないものは32.4%、逆にICMで検出された異常がTEで検出されないものは14.7%であった。

    同胞TE間の比較では、一致率は50.0%であり、不一致核型にはモザイク異常が認められた。

    結論

    ICMと3時の位置のTEのそれぞれの染色体解析で、約半数の胚で核型が一致しないことが明らかとなった。モザイク異常はICMよりもTEに多く見られたことから、初期胚で染色体異常が発生したモザイク異常を有する細胞の多くは、TEへと分化する傾向がある。または、ICMにモザイク異常がある場合には、異常細胞が細胞死するか、胚盤胞まで到達せずに発生停止となっている可能性も考えられる。PGS/PGDにおいて、TEでモザイク型の染色体異常が見られたときに、ICMでは正倍数性の核型を持つ可能性もあるため、移植する胚の決定には、モザイク染色体異常を持つ胚について、慎重に扱う必要があることが示唆された。

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