○松田　有希野1）、吉貝　香里1）、加藤　武馬2）、宮井　俊輔2）、加藤　麻希2）、新井　千登勢1）、鈴木　篤智1）、花井　里沙1）、中野　英子1）、倉橋　浩樹2）、澤田　富夫1）
1)さわだウィメンズクリニック、2)藤田保健衛生大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

目的
我々は、染色体正倍数の胚は、異数性胚に比べ、拡張胚盤胞の直径が大きいこと、Compactionに関与する細胞数が多いことを報告した。この際、配偶子形成過程で発生する構成型異常胚と受精後の初期胚で発生するモザイク型異常胚の2つをまとめて異数性として検討したが、今回、異数性を構成型とモザイク型の2つに分類し、再検討した。

方法
患者の同意を得られた廃棄胚盤胞（46個、患者平均年齢33.6±4.1歳）をNGSにより染色体解析を行った。胚盤胞は、正倍数群（N群14個）、構成型異数性群（C群12個）、モザイク群（M群11個）、構成型異数性とモザイクの両方を持つ混合群（CCA群9個）に分類した。検討項目は、Compaction完了時間、Compaction時細胞数、Compaction に関与した細胞数、胚盤胞到達時間、培養115時間時の胚盤胞の直径サイズとした。

結果
平均年齢はN群32.6±2.9歳、C群36.2±4.4歳、M群32.7±3.8歳、CCA群37.3±3.2歳であり、N群、M群に対してC群とCCA群は有意に年齢が高かった。Compaction完了時間とCompaction時細胞数については4群間に有意差がなかった。しかし、Compactionに関与した細胞数は、N群（9.5±1.9個）と比較してC群（7.7±2.4個）、M群（7.8±2.0個）で有意に少なかった。また、胚盤胞到達時間はN群（96.9±4.1時間）と比較して他の3群が有意に遅かった。（C群105.3±7.5時間、M群102.6±8.7時間、CCA群101.3±7.0時間）さらに、培養115時間時の胚盤胞サイズは、N群（168.6±24.9μｍ）と比較し、M群（150.3±22.7μｍ）とCCA群（154.4±15.5μｍ）において有意差はないものの、C群（141.6±26.1μｍ）は有意に小径であった。

考察
今回の結果より、培養115時間時、小径胚盤胞は構成型異常をもつ胚である可能性が示唆された。また、Compactionに関与した細胞数が少ない胚や、胚盤胞到達時間が、100時間を超えてくる胚についても、染色体異数性を持つ胚である可能性が示唆された。以上の結果より、凍結や移植を行う胚の優先順位付けの際にこの条件に従い、妊娠率や流産率への影響を検討していきたい。

〇新井　千登勢、吉貝　香里、松田有希野、中野　英子、澤田　富夫

目的
Caイオノフォア(以下Ca)は精巣精子や不動精子使用時に、卵子活性化が起こらず不受精となるのを回避する目的で使用されてきた。また、胚発育遅延、胚盤胞到達率が低い症例にも有効であるとの報告もある。当院で採卵を行い、低受精率や分割不良、精子運動性不良が見られた同一患者間において、Ca施行前後の成績を後方視的に検討した。

対象
2013年1月～2017年12月に採卵し、ICSI後Caを施行した患者10名、平均年齢36.5±3.5歳を対象とした。同一患者間で、Ca非施行周期とCa施行周期において、受精率、分割率、着床率、臨床妊娠率、出産率を比較した。また、2016年1月～12月に採卵・ICSI後Ca非施行患者の中から無作為抽出したノーマル群とCa施行群で受精率、分割率を比較した。

結果
同一患者間でのCa非施行周期とCa施行周期の受精率は47.8% vs. 87.4%で有意な差があった。分割率は100% vs.100%、着床率は6.3% vs. 37.0%、臨床妊娠率は6.3% vs. 29.6%、出産率は6.3% vs. 11.1% であり、分割率と臨床妊娠率、出産率に有意な差はなかったが、着床率に有意な差があった。さらに、この5項目をICSIの際に使用した精子別(新鮮精子・凍結精子・TESE精子・MESA精子)に分け、Ca非施行周期・施行周期を比較した結果、新鮮精子と凍結精子を用いたCa施行周期において受精率に有意な差があった。また、ノーマル群とCa施行群の受精率、分割率は80.5% vs.87.4%、98.1% vs. 100%であり、有意な差はなかった。

考察
Ca処理の必要な患者において、受精率と着床率が飛躍的に向上した。過去に受精障害や胚発生不良があった場合の改善策として、また不良な新鮮精子や凍結精子を使用する場合も、Caを施行することが有用であると考える。今後症例数を増やし更なる検討を行うとともに、1回のICSIでCa施行群と非施行群に分けた比較検討も必要である。

〇松田　有希野¹⁾、加藤　武馬²⁾、吉貝　香里¹⁾、新井　千登勢¹⁾、中野　英子¹⁾、澤田　富夫¹⁾、倉橋　浩樹²⁾

¹⁾さわだウィメンズクリニック、²⁾藤田保健衛生大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

目的

我々は、以前に胚盤胞の形態学的評価と染色体の正倍数性は一致しないという報告をした。しかし、本邦では着床前スクリーニングは認められていないため、移植に用いる胚は形態評価に頼らざるを得ない。よって今回、胚盤胞の大きさと染色体異常との関連をEmbryo Scope^TM(ES)とNGSを用いて調べた。

方法

正常受精した胚を5日目(D5)または6日目(D6)で胚盤胞凍結した。後に、廃棄となり患者の同意を得られた胚盤胞(D5胚盤胞22個、D6胚盤胞8個)をNGSにより染色体解析を行った。胚盤胞の大きさは、ESを用いて、凍結直前の最終拡張時胚盤胞の画像から直径2箇所の平均長を求めた。患者平均年齢は35.2±4.2歳であった。

結果

D5での染色体正常胚は8個(36.4%)、染色体異常胚は14個(63.6%)であった。平均年齢は染色体正倍数胚で34.1±2.7歳、染色体異数胚で35.9±4.0歳であり有意差はなかった。しかし、胚盤胞の大きさで、染色体正倍数胚で175.9±10.1㎛、染色体異数胚で143.1±30.5㎛となり染色体正倍数胚が染色体異数胚より有意に大きかった。D6での染色体正倍数胚は2個(25.0%)、染色体異数胚は6個(75.0%)であった。平均年齢は染色体正倍数胚で33.5±7.5歳、染色体異数胚で35.3±3.9歳であり有意差はなかった。胚盤胞の大きさは、染色体正倍数胚で202.5±10.0㎛、染色体異数胚で158.1±30.7㎛であり、有意差はないものの染色体正倍数胚のほうが染色体異数胚より大きいことがわかった。

考察

今回の検討では、染色体正倍数胚と異数胚の間に年齢による差がないことから、どの年代であってもD5凍結時170㎛、D6凍結時200㎛まで胚盤胞が大きくなっていることを確認してから凍結することにより正倍数胚を移植できる確率が高くなると期待される。

吉貝香里^1,2　加藤武馬²　松田有希野^1,2　新井千登勢¹　浅井菜緒美¹　中野英子¹

澤田富夫¹倉橋浩樹²

1さわだウィメンズクリニック、2藤田保健衛生大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

目的

近年、PGSやPGDの生検に胚盤胞期における栄養外胚葉(TE)が用いられることが多い。割球生検と比較してTE生検が胚の着床に影響しないことが報告されているが、TEで観察された染色体核型が内細胞塊(ICM)を反映していないという報告もある。（これまでFISHやアレイCGHを用いて、ICM/TEの染色体核型の比較解析が行われてきたが、報告毎に結果が異なり、統一した見解は得られていない。）そこで我々は、モザイク型染色体異常や微細な構造異常の検出が可能なNGSを用いて、同胞TEとICMを比較し、TE生検が胚盤胞期におけるICMの核型を反映しているか解析を行った。

対象・方法

2010年～2015年までに採卵後凍結し、廃棄となった18症例24個の胚盤胞を用い、患者同意を得て研究を行った。患者年齢は34.5±3.6歳であった。TEを3時の位置で１か所採取(TE1)、６時または12時の位置で採取(TE2)、さらにICMをそれぞれ採取し、核型の比較検討を行った。

結果

ICMとTEの核型一致率は52.9％であった。そのうち、ICM/TEともに正倍数を示す胚は12個 (35.3%) であった。核型が不一致となり、どちらかに染色体異常を有した胚はモザイク異常であり、TEで検出された異常がICMで検出されないものは32.4％、逆にICMで検出された異常がTEで検出されないものは14.7％であった。

同胞TE間の比較では、一致率は50.0％であり、不一致核型にはモザイク異常が認められた。

結論

ICMと3時の位置のTEのそれぞれの染色体解析で、約半数の胚で核型が一致しないことが明らかとなった。モザイク異常はICMよりもTEに多く見られたことから、初期胚で染色体異常が発生したモザイク異常を有する細胞の多くは、TEへと分化する傾向がある。または、ICMにモザイク異常がある場合には、異常細胞が細胞死するか、胚盤胞まで到達せずに発生停止となっている可能性も考えられる。PGS/PGDにおいて、TEでモザイク型の染色体異常が見られたときに、ICMでは正倍数性の核型を持つ可能性もあるため、移植する胚の決定には、モザイク染色体異常を持つ胚について、慎重に扱う必要があることが示唆された。

〇松田　有希野¹⁾、加藤　武馬²⁾、吉貝　香里¹⁾、浅井　菜緒美¹⁾、新井　千登勢¹⁾、中野　英子¹⁾、倉橋　浩樹²⁾ 、澤田　富夫¹⁾

¹⁾さわだウィメンズクリニック、²⁾藤田保健衛生大学総合医科学研究所分子遺伝学研究部門

目的

近年、染色体異常の発生は刺激法や胚操作などの外的要因よって左右されるという報告がある。また、施設間での格差がでていることも報告されているため、当院での染色体異常の発生頻度を検討した。

方法

採卵後、IVFまたはICSIにて媒精を行い、正常受精し凍結保存した83個の胚を対象とした。対象とした廃棄胚は患者の同意を得て、研究に使用した。染色体解析の結果は、正倍数胚群、構成型異数胚群、モザイク群、構成型の異常とモザイクを併せ持つ混合群にわけた。検討項目は、患者年齢、刺激方法、媒精方法、ICSI施行者、hMG総投与量とした。

結果

患者年齢は正倍数胚群で32.8±3.8歳、構成型異数胚群で35.9±4.2歳、モザイク群で33.8±3.2歳、混合群で35.2±2.6歳となり、正倍数胚群と比較して、構成型異数胚群と混合群で有意に年齢が高かった。刺激方法では、Long法では、モザイク異常の発生がantagonist法やクロミッド法より有意に低かった。媒精方法の検討においては、c-IVFとICSIで有意差は認められなかった。ICSI施行者の違いによる差異も認められなかった。また、hMG総投与量では、染色体正倍数胚で1656.3±542.4IU、構成型異数胚群で1783.4±619.0IU、モザイク群で1442.3±613.7IU、混合群で1525.0±466.4IUとなり有意差は認められなかった。

考察

今回の結果から、女性の年齢上昇に伴い、構成型の染色体異常が増えることが明らかとなった。また、モザイク異常は年齢に関係なく発生していたため、若年者の発生停止胚や胚変性の主な原因であると考えられた。刺激方法では、モザイク型異常の発生が低かったことから、Long法を行える患者については第一選択としたほうがよいと考える。さらに、当院では媒精方法やICSI施行者によって有意差がないことから、外的要因の影響は少ないと考えられた。